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            細胞培養中的那些問題

            點擊次數:146 發布時間:2021-11-19

                                                                          細胞培養中的那些問題

                                                                      上海連橋生物科技有限公司

                   做細胞培養的同學如果互相交流會發現,不同的實驗室有些規則是不一樣的,初學者經常不知對錯,小編今天就和大家總結一下這些問題,希望對你的細胞之路有所幫助。

            購買之細胞冷凍管經解凍后,為何會發生細胞數目太少之情形?

            研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。

            有必要做熱滅活嗎?

            實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

            細胞冷凍管解凍培養時,是否應馬上去除DMSO? 

            除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中,待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。

            DMSO之等級和無菌過濾之方式為何?

            冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本身即為無菌狀況,第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于4 C,避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質,并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜。

            可否使用與原先培養條件不同之培養基?

            不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。

            可否使用與原先培養條件不同之血清種類?

            不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

            培養基中是否須添加抗生素?

            除于特殊篩選系統中外,一般正常培養狀態下,培養基中不應添加任何抗生素。

            細胞冷凍培養基之成份為何?

            動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意:由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成。

            細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?

            冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial,融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。

             L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?

            L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

            GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定? 

            GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。

            血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?

            血清中沉淀物的出現有許多種原因,但的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

            為什么要熱滅活血清? 

            加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

                                                                                                                                                                本篇轉載至實驗之家

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